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酶標(biāo)儀(ELISA)是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法,用于檢測和分析樣品中特定物質(zhì)的存在和濃度。它基于酶與其底物之間的特異性相互作用,在酶催化下生成可測量的信號。
酶標(biāo)儀的工作原理如下:
1. 固相試驗(yàn):首先,在酶標(biāo)板或其他固體支持基質(zhì)上涂覆反應(yīng)物(例如抗體或抗原)以固定樣品中的目標(biāo)物質(zhì)。
2. 樣品加入:將含有待測物質(zhì)的樣品加入到涂有反應(yīng)物的酶標(biāo)板中,樣品中的目標(biāo)物質(zhì)與固定在酶標(biāo)板上的反應(yīng)物發(fā)生特異性結(jié)合。
3. 洗滌:通過洗滌去除未結(jié)合的樣品成分,使只有特異性結(jié)合的復(fù)合物保留在酶標(biāo)板上。
4. 二級抗體結(jié)合:加入與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合的二級抗體,這個(gè)二級抗體上結(jié)合有酶(通常是辣根過氧化物酶HRP)。
5. 再次洗滌:洗滌去除未結(jié)合的二級抗體,只保留特異性結(jié)合的復(fù)合物在酶標(biāo)板上。
6. 底物加入:加入與酶結(jié)合產(chǎn)生可測量信號的底物,底物被酶催化后生成可檢測的產(chǎn)物(通常是有色或熒光物質(zhì))。
7. 信號檢測:使用光學(xué)方法(如分光光度計(jì)或熒光儀)測量產(chǎn)生的信號強(qiáng)度,該信號與樣品中目標(biāo)物質(zhì)的濃度成正比。
根據(jù)酶標(biāo)儀的測量原理和功能,可以將其分為以下幾類:
1. 光度酶標(biāo)儀(Photometric ELISA):通過測量產(chǎn)生的有色產(chǎn)物的吸光度變化來定量分析目標(biāo)物質(zhì)的濃度。常用于測定蛋白質(zhì)、抗體等。典型的光度酶標(biāo)儀有分光光度計(jì)和ELISA讀板機(jī)。
2. 熒光酶標(biāo)儀(Fluorometric ELISA):通過測量熒光產(chǎn)物的強(qiáng)度來定量分析目標(biāo)物質(zhì)的濃度。相比光度法,熒光法具有更高的靈敏度和特異性。常用于分子探針標(biāo)記的核酸和蛋白質(zhì)的檢測。典型的熒光酶標(biāo)儀有熒光分光光度計(jì)和熒光讀板機(jī)。
3. 放射酶標(biāo)儀(Radioactive ELISA):使用放射性同位素作為檢測信號的酶標(biāo)儀。通過測量樣品中放射性同位素的衰減來定量分析目標(biāo)物質(zhì)的濃度。由于放射性材料具有較高的危險(xiǎn)性,該方法已經(jīng)逐漸被其他非放射性方法取代。
4. 酶免疫測定儀(Enzyme Immunoassay Analyzer):使用多通道的酶標(biāo)儀,可同時(shí)處理多個(gè)樣品。這種酶標(biāo)儀可以自動化操作,提高實(shí)驗(yàn)的效率和準(zhǔn)確性。酶免疫測定儀可以根據(jù)具體需要選擇光度、熒光或放射性檢測方式。
5. 分子診斷酶標(biāo)儀(Molecular Diagnostics Analyzer):這種酶標(biāo)儀主要用于分子診斷領(lǐng)域,用于快速檢測病原體的核酸。它可以通過PCR或其他核酸擴(kuò)增技術(shù)將目標(biāo)核酸擴(kuò)增后與探針結(jié)合,再使用熒光或放射性信號進(jìn)行檢測。
總之,酶標(biāo)儀是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法,根據(jù)不同的測量原理和功能,可以進(jìn)行光度、熒光、放射性、自動化分析以及分子診斷等不同類型的檢測。這些分類的酶標(biāo)儀具有各自的優(yōu)缺點(diǎn)和適用范圍,科學(xué)家可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的儀器來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。